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2021年央視3·15晚會，報道了河北省青縣養殖戶在養羊過程中，為了增加出肉率，在飼料中偷偷混入瘦肉精的情況。據統計，我國近十年瘦肉精相關事件及通報幾十起，幾乎每年都能檢測出含有“瘦肉精”的肉類及其制品。“瘦肉精”主要是一類叫做腎上腺素受體激動劑的物質，包括克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇和苯乙醇胺A等物質，在養殖過程中使用，可以促進動物機制的新陳代謝，降低骨骼肌脂肪，增加瘦肉率并改善肉質色澤，長期食用殘留瘦肉精的畜禽肉，藥物在體內積蓄到一定程度時，會引起各種不良反應，如心律失常、過敏性丘疹、嘔吐等，嚴重還可能誘發冠心病、高血壓，甚至惡性腫瘤。我國已明令禁止在牲畜喂養過程中使用任何瘦肉精。

瘦肉精在毛發中的殘留時間很長，停用12周以上仍能夠被檢測，農業農村部據此制定了利用動物毛發樣品檢測瘦肉精的技術標準。2022年9月，農業農村部正式頒布公告，發布并開始實施《動物毛發中克侖特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇和苯乙醇胺A的測定》檢測方法，用于檢測動物毛發中瘦肉精殘留量。高效液相色譜-串聯三重四極桿質譜法測定瘦肉精具有高靈敏性、操作簡便、分析自動化、節省時間、重現性好、效率成本比價高、假陽性率低等優點。本應用中心參考以上標準，建立了使用超高效液相色譜-串聯三重四極桿質譜測定動物毛發中“瘦肉精”殘留的快速且高靈敏度的分析方法，為食品安全檢測提供有效技術支持。

關鍵詞：LC-MS/MS、食品、養殖、動物毛發、瘦肉精、農業農村部公告 第600號

實驗部分

儀器

表1 液相色譜串聯三重四級桿質譜儀

表2 液相色譜串聯三重四級桿質譜儀檢測參數

試劑及標準品

      試劑：質譜級甲酸(CNW)、色譜級甲醇（Merck）、色譜純乙腈（Merck）；檸檬酸鈉、氯化鈉、乙酸鈉（國藥集團）；氨水（CNW）；十二烷基磺酸鈉（阿拉丁）

       純水：18.2 MΩ·cm去離子水（25℃）；

      標準品：克侖特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇和苯乙醇胺A客戶提供；內標克侖特羅-D9、萊克多巴胺-D6、沙丁胺醇-D3和苯乙醇胺A-D3均購自阿爾塔。

樣品前處理

      參考農業農村部公告第600號，具體前處理步驟如下：

樣品制備：

      選取動物背部毛發，根部剪斷，保存備用。取適量毛發加入燒杯中，加入十二烷基磺酸鈉溶液，于超聲清洗器上超聲清洗30 min，水洗凈毛發，40 ℃電熱干燥箱中烘干，烘干后將其制成粉末。

樣品前處理：

       稱取試樣于離心管中，加入混合內標工作溶液，0.1 mol/L鹽酸，渦旋混勻，于60 ℃水浴中水解4 h，7000 r/min離心10 min，取上清液備用。固相萃取柱依次用少許甲醇，水預洗，取全部備用液過柱，依次用少許水，甲醇淋洗，抽干，用5%氨水甲醇溶劑洗脫，收集洗脫液，于50 ℃氮吹吹干，用0.1%甲酸乙腈溶液溶解，過0.22 um濾膜，供液相色譜-串聯質譜儀測定。

測試結果

靈敏度 

      精密稱取混合標準工作溶液和混合內標工作溶液適量，用0.1%甲酸乙腈溶解并定量稀釋成濃度為0.50 ng/mL的溶液，測試各化合物信噪比（峰-峰）。

表1 各化合物信噪比 

圖2  各化合物信噪比結果

樣品測試結果

      動物毛發樣品經過2.6前處理后測試結果如下所示。

表2 動物毛發樣品測試結果

*ND=Not Detected

表3 動物毛發樣品測試結果

加標回收率結果

       在試樣中分別加入100 ng/mL的混合標準工作液10 uL、25 uL、50 uL，按照3.6前處理方法進行樣品處理，測試結果如下所示。沙丁胺醇加標回收率在86.20%-103.11%，萊克多巴胺加標回收率在80.64%-117.28%，克侖特羅加標回收率在81.93%-109.23%，苯乙醇胺A加標回收率在71.83%-98.40%。

表4 各化合物加標回收率測試結果 

結語

      本文使用LC-MS/MS對動物毛發中克侖特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇和苯乙醇胺A含量進行檢測，考察方法的線性、靈敏度、穩定性、加標回收率。各化合物線性系數大于0.998；0.5 ng/mL的標準物質溶液信噪比（峰-峰）均大于27；標準溶液在濃度為1 ng/mL、2 ng/mL、5 ng/mL和10 ng/mL時連續6次進樣，保留時間RSD不超過0.16%，相對峰面積RSD均小于10%；各化合物在100 ng/mL濃度水平的加標回收率在80%~120%之間。以上結果表明，該方法靈敏度高，精密度良好，滿足農業農村部關于動物毛發中克侖特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇和苯乙醇胺A含量測定的要求。

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•  附錄

設備與耗材方案

一、EXPEC 5210配置詳情

二、標準品

• 液相色譜-三重四極桿質譜聯用儀

  檢測儀器在線詢價